产品描述：

NAD+/NADH 检测试剂盒(WST-8 法) (NAD+/NADH Assay Kit with WST-8)是一种基于 WST-8 的显色反应，通过比色法来检测细胞、组织或其 它样品中 NAD+ (氧化型辅酶 I)和 NADH (还原型辅酶 I)各自的量、比值和总量的检测试剂盒。 NADP+/NADPH 以及 NAD+/NADH 的传统检测方法是检测 340nm 处吸收波长的变化，易受样品中有类似紫外吸收物质的干扰，并且在紫外检测过程中通常需要加大检测样品量以弥补 NADPH 在 340nm 处吸光度过小的不足，因此该检测方法具有很大的局限性。 WST-8 是 MTT 的一种升级替代产品。WST-8 产生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。并且 WST-8 产生的 formazan 比 XTT 和 MTS 产生的 formazan 更易溶解。再次，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8 和 MTT、XTT、 WST-1 等相比，线性范围更宽，灵敏度更高。 NAD (Nicotinamide adenine dinucleotide，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)是所有细胞中都存在的一种辅酶，包括 NAD 本试剂盒使用便捷，无需分离纯化细胞、组织或其它样品中的 NAD +和 NADH，并且能特异性检测 NAD+和 NADH，而不检测 NADP +和 NADPH。可以检测含量低至 0.25μM (5pmol)的 NAD+或 NADH，在 0.25μM (5pmol)至 10μM (200pmol)之间呈现良好的线性关系。+ (氧化型)和 NADH (还原型)两种形式。NAD +既是氧化还原反应过程中传递电子的辅酶，又可以作为很多酶的底物来参与细胞内反应。NAD +在细胞和体内发挥着重要的功能，其合成和降解及其产物参与细胞凋亡、代谢调控和基因表达的调控等，并且 NAD+的减少是细胞死亡的主要因素之一。虽然 NMNAT (nicotinamide mononucleotide adenylyl transferase)是 NAD+的合成酶，包括 Nmnat1、Nmnat2 和 Nmnat3，但 NAMPT (Nicotinamide phosphoribosyl transferase)通常被认为是 NAD+合成的限速酶。NAD+在调节细胞氧化还原状态方面的重要性以及调控信号通路及转录方面的 功能，使得 NAD+及其合成和消耗的酶成为多种疾病的潜在药物靶点。

本试剂盒可检测样品中的 NAD+、NADH 以及它们的比值，具体原理如下： 

1) 测定 NAD+和 NADH 的总量：乙醇(Ethanol)在乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase, ADH)的作用下氧化生成乙醛(Acetaldehyde)，在这一反 应过程中 NAD+被还原为 NADH；生成的 NADH 在电子耦合试剂作用下将 WST-8 还原生成橙黄色的 formazan，在 450nm 左右有最大吸收峰。反应体 系中生成的 formazan 与样品中 NAD+和 NADH 的总量呈比例关系。WST-8 法检测 NAD+和 NADH 总量的原理参考图 1。 

2) 单独测定 NADH 的量：60℃水浴加热 30 分钟后，样品中 NAD+会分解而只保留 NADH。NADH 将 WST-8 还原成 formazan，通过比色法确定反应 生成的 formazan 的量，最终可以确定样品中 NADH 的量。

3) 测定 NAD+以及 NAD+/NADH 比值：根据前两步检测获得的 NAD+和 NADH 的总量以及 NADH 的量，即可计算得到样品中 NAD+的量以及 NAD+/NADH 的比值。

本试剂盒适用于检测细胞、组织以及其它适当样品中的 NAD+和 NADH 各自的量、比值和总量。 在检测组织及其它样品中的 NAD+、NADH 以及它们的比值时，考虑到有些样品本身的颜色对 450nm 处吸光值的检测有影响，建议设置加入样品而 不加入乙醇脱氢酶的对照。 当仅检测样品中NAD+和NADH的总量或NADH的量时，一个本试剂盒可以进行100次检测；当检测NAD+或者NAD+/NADH的比值时，一个本试剂盒可以进行 50次检测。

注意事项: 

1)试剂盒中所有组份均要冷冻保存。如果不是一次用完，为避免反复冻融导致产品失效，请适当分装后保存。

2) NADH 不稳定，取出 NADH 后请尽快使用。如果发现标准曲线不理想，很有可能是标准品发生了降解。 

3）由于 NAD+/NADH 提取液本身比较粘稠，以该提取液作为稀释液时，无论对标准品还是样品进行稀释，在稀释过程中务必保证稀释均匀，否则 易造成实验数据产生较大波动。 

4）在样品加样和混匀过程中，须尽量避免产生气泡，以免影响最终的吸光度测定。 

5）如果不能非常严格地控制反应温度和反应时间，每次检测都需要设置标准曲线。

6）如果样品溶液中 NAD+和 NADH 浓度过高或过低，不在试剂盒的线性检测范围内时，可适当调整样品或者提取液的用量。 

7）由于 NAD+和 NADH 很不稳定，在冻存过程中较易降解，所以宜尽量使用新鲜样品进行检测。 

8）本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅。 

9) 本公司所有产品必须由合格专业技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程！

保存条件：

密封避光-20℃保存，一年有效。显色液和 NADPH 须-20℃避光保存。 NADH 配制成溶液后，须适当分装后-80℃保存。所有试剂避免反复冻融。