主要组分：Tris-HCl 、NaCl 、 EDTA 、 NP-40、  DTT、 MgCl2。

应用：

    本产品可以用于蛋白-蛋白（GST pull-down）相互作用的研究。

    GST pull-down实验大致有两种用途，其一是鉴定已知GST标签蛋白与另一蛋白的相互作用；其二是大量捕获各种可能的与“诱饵”蛋白有相互作用的多种蛋白，以用于质谱分析、检测和鉴定。

操作步骤（仅供参考）：

    a. 轻轻摇动GST-tag蛋白纯化介质，使其完全重悬，吸取适量50%的凝胶悬液至离心管中(每个样品需要50μl 50%的凝胶悬液)，加入20倍体积的GST pull-down蛋白结合缓冲液(例如50μl 50%的凝胶悬液加入1ml蛋白结合缓冲液)，颠倒混匀以平衡凝胶。1000g离心2分钟，小心吸除管内液体。加入与凝胶等体积的GST pull-down蛋白结合缓冲液重悬凝胶以获得平衡好的50%凝胶悬液(例如起始为50μl 50%的凝胶悬液加入25μl GST pull-down蛋白结合缓冲液重悬)。

    b. 参考下表，依次加入GST pull-down蛋白结合缓冲液、经步骤a平衡好的GST-tag蛋白纯化介质、靶蛋白和GST标签蛋白(诱饵蛋白)或GST蛋白(阴性对照)。      

    c. 颠倒混匀各管，置于侧摆摇床上，4ºC孵育2h或过夜。

    d. 4ºC 1000g离心2分钟，将上清转移至新的离心管中，留作后续分析。

    e. 加入100μl GST pull-down蛋白结合缓冲液重悬凝胶，4ºC离心(1000g×10s)，小心吸除上清。

    f. 重复步骤e 2次，以充分洗去未结合的蛋白。

    g. 加入50μl GST pull-down洗脱缓冲液，轻轻晃动并孵育10分钟。

    注：也可以直接向凝胶中加入25μl SDS-PAGE上样缓冲液(2X)，煮沸5分钟后离心(12000g×1min)取上清用于后续检测。

    h. 4ºC 1000g离心2分钟，小心吸取上清用于后续检测。后续常用于SDS-PAGE后考马斯亮蓝染色、银染或者Western检测。