产品描述：

Universal Bacterial Live/Dead Cell Viability Assay Kits (SYTOLive™ 9, PI))本试剂盒专为细菌活力检测设计，操作简便，核心采用 SYTOLive™ 9 绿色核酸染料与碘化丙啶（PI）红色核酸染料，基于细胞膜完整性差异实现活菌 / 死菌精准区分：SYTOLive™ 9 可染色所有细菌，PI 仅能进入细胞膜破损的死菌。在死菌中，SYTOLive™ 9 与 PI 发生荧光能量转移，其绿色荧光被淬灭，因此死菌不显示绿色荧光。相比传统方法受菌种代谢特性限制、背景荧光高、适用范围窄等问题，本试剂盒不受细菌生长及染色条件严格限制，15 分钟内即可完成各类细菌的快速、可靠活菌 / 死菌定量检测。试剂盒独立分装 SYTOLive™ 9 与 PI 溶液，可按需灵活调整染料配比，便于荧光定量校准，适配不同实验环境，获得更佳染色效果，结果准确、重复性高。

产品特点：

• 快速定量区分不同类型细菌中的活菌与死菌； 

• 高通量检测：可满足大批量样本的规模化、高通量检测需求，适配批量实验场景。

产品组分：

储运条件：-20 ℃避光保存，冰袋运输

注意事项：

1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

2. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。 

3. 产品仅限于科研用途并且不得存放于普通住宅内。

4. 为了您的安全和健康，请遵循您所在常规实验室安全规定。

操作步骤：

1.收集与洗涤细菌：

（1）将细菌悬液置于离心管中，10000× g 离心 10 min，小心吸弃上清液，取 0.85% NaCl 溶液重悬。

（2）用 0.85% NaCl 溶液洗涤细菌悬液 1-2 次，操作同上。 注：细菌悬液洗涤过程中，不建议使用磷酸盐缓冲液。

2.制备死细菌悬液：

（1）将细菌悬液置于离心管中，于 95 ℃水浴锅 5 min，获得死细菌悬液。

（2）可按照所需实验目的，按比例混合活死细菌。

注：本方法为灭活处理参考方案，仅供参考，实际可根据研究需求调整。

3.细菌重悬与计数： 

（1）取菌液测定 670 nm 的光密度(OD670)。

（2）使用 0.85% NaCl 溶液将细菌悬液稀释 OD670 到 0.03-0.15 左右。

注：可根据样本种类与实验条件灵活调整，以显微镜下视野中细菌分布清晰可辨为宜。

4.细菌染色： 

（1）在离心管内，将组分A (SYTOLive™ 9/PI Dye Mixture 1)和组分B (SYTOLive™ 9/PI Dye Mixture 2)按 1∶1 的体积比混匀得到染料混合液。

（2）取 1 mL 细菌悬液，加入 3 μL 上述染料混合液，轻柔混匀。

（3）室温避光孵育 15 min（孵育时间可根据预实验结果优化）。

注：特殊情况下，若特殊菌株染色效果不佳，可通过查阅文献优化实验步骤进行优化。

5.收集与重悬： 

（1）孵育结束后，10000× g 离心 10 min，收集细菌。

（2）小心吸弃含染料的上清液（此为废液，需妥善处理）。 

（3）用 400 μL 0.85% NaCl 溶液重悬细菌，制成待测样品。

6.显微镜观察与拍照： 

（1）载玻片法：取 5 μL 细菌悬液滴加于洁净载玻片上，轻轻盖上盖玻片，避免产生气泡，置于荧光显微镜下观察