产品内容：

储存条件：-20℃避光保存，有效期见外包装。

产品介绍

     CFDA SE 细胞增殖与示踪检测试剂盒是基于 CFDA SE 对细胞进行增殖及示踪检测的试剂盒，本试剂盒由 CFDA SE 粉末、溶剂及染色缓冲液组成。

    CFDA SE 是二乙酸荧光素（Fluorescein diacetate，FDA）的衍生物，具有细胞膜渗透性，本身不具有荧光发光性。当 CFDA  SE 穿透细胞膜进入活细胞后，可被胞浆内的酯酶催化生成羧基荧光素琥珀酰亚胺酯（carboxyfluorescein succinimidyl ester， CFSE），可发强烈的绿色荧光，不能穿透细胞膜，能完好的保留在胞内。CFSE 还可自发并不可逆地与细胞内的氨基共价结 合从而偶联到细胞蛋白质上。同时，过量且未被偶联的 CFDA SE 通过被动扩散回到细胞外培养基内，被后续清洗步骤所清除。经 CFDA SE 标记的非分裂细胞的荧光非常稳定，稳定标记的时间可达数月，因此非常适用于细胞群落分析。 

    CFDA SE 标记细胞的荧光非常均一，优于以前使用的其他细胞示踪荧光探针如 PKH26，并且分裂后的子代细胞的荧光 分配也很均一。在细胞分裂增殖过程中，CFSE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，荧光强度变为亲代细胞的一半，通 过流式细胞仪（FL1 通道）根据荧光强度的不同，可检测出未分裂细胞，分裂一次（1/2 的荧光强度），二次（1/4 的荧光强 度），三次（1/8 的荧光强度），以及更多分裂次数的细胞。CFDA SE 可检测分裂次数多达八次甚至更多。经 CFDA SE 标 记的细胞可用于体外和体内增殖研究，且具有不会使邻近细胞染色的功能。CFDA SE 最常用于淋巴细胞的增殖检测，也可 用于成纤维细胞，NK 细胞等其他细胞的增殖检测。 

    CFDA SE 标记细胞呈绿色荧光，除了流式细胞仪检测细胞增殖外，还可用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。

使用方法

1. 试剂准备

    （1）CFDA SE 储液的配制：取 1 管试剂盒中提供的 CFDA SE 恢复至室温，瞬时离心，使粉末充分沉降至管底，向其中加 入 100 μLCFDA SE 溶剂（BN16034加入 20μLCFDA SE 溶剂），充分溶解，即可配制成 CFDA SE 储液（1000×）。配制好的 CFDA SE 储液，-20℃避光保存，有效期两个月。-70℃避光保存可适当延长使用时间。 

    （2）CFDA SE Buffer 的配制：用细胞培养级无菌水按需稀释 10× CFDA SE Buffer 至 1×。配制好的 1× CFDA SE Buffer，可 以 4℃保存，长期不用可以-20℃储存。

2. 标记和检测 

    （1）离心收集细胞，用 1 mL 1×CFDA SE Buffer 重悬细胞于 15 mL 离心管中，调整细胞浓度为 1-5×106 cells/mL。

    （2）CFDA SE 工作液的配制：将 CFDA SE 储液（1000×）用 1×CFDA SE Buffer 稀释至 2×。 

    （3）染色：将 1 mL CFDA SE 工作液（2×）加入 1 mL 待标记的细胞悬液中，上下颠倒混匀，37℃孵育 10 min。 

    （4）立即向离心管中加入 5 倍体积预热的完全培养基（含血清），上下颠倒混匀以终止标记反应。 

    （5）1000 rpm，5 min 室温离心去上清，再用 5-10 mL 完全培养基洗涤一次。 

    （6）再加入 5-10 mL 完全培养基，37℃孵育 5 min，以促进 CFDA SE 在细胞内的驻留及未反应的 CFDA SE 进入完全细胞 培养液。1000 rpm，5 min 室温离心去上清，完成最后一次洗涤。

    （7）随后即可按照细胞的正常培养方法进行培养。可以在荧光显微镜下直接观察标记效果，也可以在培养适当时间后用流 式细胞仪检测细胞增殖，呈绿色荧光。标记的细胞也可用于活体动物的移植，并进行荧光示踪。 

注：a. 若需要对细胞进行固定，请用醛类固定剂如 4%多聚甲醛于室温固定 15 min；之后若还需要进行其他如抗体标记，请用冰丙酮透化处理细胞 10 min。b. 对于不同细胞，CFDA SE 的最佳标记浓度和孵育时间是不同的，初次实验可按照实验步 骤进行，若效果不佳，建议调整染色浓度以及孵育时间，获得最佳标记效果。 

注意事项 

    1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。 

    2. CFDA, SE 易被水解，在水溶液中会很快变质，请在使用过程中避免接触水。在标记细胞的过程中和水接触是在许可的范 围内的。

    3. CFDA SE 溶剂在 4ºC、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以 20-25ºC 水浴温育片刻至全 部融解后方可使用。 

    4. 本试剂盒对 CFDA SE 染色体系做了优化处理，但建议使用者根据自身的细胞类型，培养条件以及应用方向来梯度摸索最 佳的工作浓度及染色时间。不同的细胞其细胞内酯酶活性不同，因此染色效果具有差异性。 

    5. 荧光染料均存在淬灭问题，操作过程中请注意避光，以减缓荧光淬灭。 

    6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。