储运条件：-20℃ 避光保存，有效期见外包装。冰袋运输。 

产品介绍 

SatGreen qPCR Master Mix for HRM (2×)是一款专为实时荧光定量PCR与高分辨率熔解曲线(HRM)分析设计的预混试剂。其核心成分为优化配比的2×SatGreen Master Mix for HRM，可在同一体系中无缝完成qPCR扩增与HRM分析，实现“一步式”检测流程。该试剂采用新型dsDNA饱和染料SatGreen，“按需释放”机制使其无序列偏好性，极低浓度下即可稳定结合dsDNA。相比传统SYBR Green I类染料，SatGreen对PCR扩增的抑制作用更低，同时避免染料重排导致的信号偏差，搭配ROX Reference Dye可有效校正孔间荧光差异。适用于SNP分型、基因突变扫描、甲基化状态检测等多种应用，为分子诊断、遗传学研究及临床科研提供高灵敏度与高特异性的支持。

产品特点 

高灵敏度：可精准识别DNA序列中的细微差异，包括单碱基变化，为高分辨率熔解曲线(HRM)分析提供可靠保障；

稳定性优异：对PCR扩增的抑制作用极低，可兼容快速PCR程序，确保反应高效、稳定、重复性好。

产品组分

注意事项 

     1. 本产品中含有荧光染料，保存本产品或配制 PCR 反应液时应避免强光照射。 

     2. SatGreen Master Mix for HRM（2×）在 -20℃ 不会冷冻，若发现冻上，将其置于室温 融化，并轻轻涡旋混匀，后续所有实验应在冰上操作。 

     3. 使用前请上下颠倒轻轻混匀，请不要使用振荡器进行混匀，尽量避免出现泡沫，并经瞬 时离心后使用。 

     4. 引物纯度对反应特异性影响很大，建议使用 PAGE 级别以上纯化的引物。 

     5. 本产品仅限于科研用途并且不得存放于普通住宅内。 

     6. 为了您的安全和健康，请遵循您所在常规实验室安全规定。

FAQ 

1. 问：基因组 DNA 模板量和纯度有什么要求？ 

答：在 20μL 反应体系中，基因组 DNA 模板量一般小于 100 ng。模板纯度要求为 OD260/OD280 在 1.6 - 2.0 之间，OD260/OD230 在 1.5 - 2.0 之间。 

2. 问：进行 HRM 分析时，对样品的基因组 DNA 纯化方法有什么建议？ 

答：尽可能对 HRM 分析的所有样品使用相同的基因组 DNA 纯化方法，避免由于不同提取方法中使用的洗脱缓冲液的不同组成而引入差异。 

3. 问：可以用 50 μL 体系吗？ 

答：HRM 具有很高的灵敏性，在条件允许的情况下可使用 50 μL 反应体系，大的反应 体系可提高反应重复性，减少实验误差对熔解曲线的负面影响。 

4. 问：HRM 分析中，引物设计有哪些要点？ 

答：较短的 PCR 产物可提高 HRM 的分辨率。设计 PCR 引物时，尽量保持产物长度 在 80 - 300 之间。对于单核苷酸多态性（SNP）分析，建议使用 80 - 120 个碱基对 的 PCR 产物，且 SNP 位点尽量处在 PCR 产物序列中间位置。虽然较大的产物也 能分析，但通常分辨率较低，因为单个碱基的变化对 100 个碱基对的 PCR 产物的 熔解行为的影响比对 350 个碱基对的 PCR 产物的影响更大。 

5. 问：所有检测实验都需要设置无模板对照吗？为什么？

答：所有检测实验中都应包括一个无模板对照（NTC），可检测潜在的污染。

6. 问：单核苷酸多态性基因分型实验，对基因组 DNA 对照有什么要求？ 

答：对于单核苷酸多态性基因分型实验，每种可能的基因型（野生型、杂合子、变异型） 至少需要一个已知基因型的基因组 DNA 对照。 

7. 问：扩增时对 PCR 循环次数有什么要求？

答：扩增时要设定足量的 PCR 循环次数，使所有样本都达到 PCR 的平台期，以确保产 生足量的扩增产物用于 HRM 分析。因为 PCR 产物量会影响 PCR 产物的熔融温度。