那使用时我们该如何选择那??? 蛋白Marker? 蛋白Marker:即蛋白分子量标准,是一些已知分子量的蛋白质的混合物,像“尺子”一样用来指示蛋白质条带的大小。 在Western Blot过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样虽然是其中小小的一环,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。Marker的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小,只有标准量精确无误了,实验结果才有说服力,除此之外,蛋白Marker还有显示转膜是否成功、以及蛋白在凝胶上的电泳程度等作用,因此选择正确的蛋白Marker也是Western Blot实验成功的必要条件之一。百瑞极提供7款不同类形的蛋白marker BN20606 彩虹广谱蛋白Marker(10-310KD) 250ul(50T) 590 10×250ul(500T) 5200 BN24293 次高分子量蛋白质Marker(43-200kDa),非预染 10T 260 BN27001 彩虹180广谱蛋白Marker(11-180KD) 250μl,50T 380 BN27002 彩虹245广谱蛋白Marker(11-245KD) 250μl,50T 400 BN27015 低分子量蛋白Marker(14.4-97.4KDa) 20T 110 BN27016 超低蛋白Marker(3.3,5.8,7.8,14.4,20.1KD) 15T 335 BN27017 低分子量蛋白Marker(14.4-97.4KDa,预染) 20T 160 蛋白Marker的分类 总体来说,目前最常用的蛋白Marker分为非预染蛋白Marker和预染蛋白Marker。 非预染蛋白Marker 是几种已知分子量并纯化好的蛋白质预混液,方便不同大小的蛋白比较。非预染的Marker使用上不如预染Marker好用,因为电泳过程中完全看不到,电泳结束后经过蛋白染色后才能起指示作用,无法在实验过程中起预示参照作用,属于“后知后觉”型的。但是由于蛋白没有附带染料分子或者是标记分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,所以比较准确,可以精确判断蛋白大小。 预混的Marker通常有几条带加倍浓度作为指示,因为混合的条带越多,越不好记,谁知道哪条是哪条!数到眼都花了。所以当看到特别浓的那几条标志带就记得是哪里了。不过要记得,小带通常都不那么容易看清楚的。在选择上来说,当然是选择其中至少有一条条带和自己的目的蛋白大小相近的最好,越近越好。 预染蛋白Marker 预染蛋白Marker是纯化好的一些蛋白,通过与染料共价耦联后混合在一起,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。 预染蛋白Marker的出现方便了我们的实验,这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时、电泳后,以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率——比如,已知垂直电泳最佳分辨区域大约在胶的2/3处,如果使用预染Marker就可以预测目标蛋白进入最佳分辨区时停止电泳以得到最佳分辨效果;如果观察到Marker电泳异常也可以及时终止电泳;另外在Western Blot转膜以后可以直接观察蛋白转膜是否完全,还可以在膜上标记蛋白分子量,所以吸引了许多实验室人员购买预染蛋白标准。 值得注意的是,预染蛋白Marker与染料共价耦联,所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化,可能导致一些偏差,所以不太适合精确定位蛋白——不过多数情况下Marker的条带未必能和我们的目标蛋白完全一样,我们得到的也不过是一种相对Marker指示的参考大小,最后都需要Western来定性,所以如果不是要区分大小相近的条带,预染Marker还是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白标准一起使用。 预染蛋白Marker的分类 预染蛋白Marker又分:单色预染和多色预染,单色预染蛋白Marker通常会利用其中某些条带加倍浓度加深某些条带的粗细,来提示其大小的,方便我们快速记忆和区分各个条带的大小。而彩色蛋白Marker则用不同的颜色来区别,就更加好辨认啦。而且如果沉闷的电泳实验中跑出多彩的彩虹Marker,此时心情想必会愉快一些! 三色预染蛋白Marker, (11-180kDa) 彩虹 (11-245 kDa) 除了上面介绍的,市面上还有一些其他类型的蛋白Marker:如荧光蛋白Marker、生物素化Marker、显影蛋白Marker等…。 此外,蛋白Marker按分子量范围又分为高分子量、低分子量、宽分子量几类。检测大分子量蛋白经常使用到高分子量范围Marker,检测小蛋白甚至是一些多肽常会用到小分子量范围Marker。如果从整个实验室考虑,选宽分子量、条带分布比较均匀的Marker,这样你的蛋白无论在哪个区间都容易判断。 蛋白marker的种类真多啊!自己选起来好麻烦。 有没有很经典实用、使用广泛、且性价比好的推荐? 有的,安排! 值得入手的蛋白Marker 1 Rainbow Protein Marker(10-310kD)(BN20606) 现货· 2 彩虹180广谱蛋白marker(BN27001) 彩虹245广谱蛋白marker( BN27002) 产品特色: 三色预染,颜色鲜亮,条带整齐,便于观察。 稳定性能突出,经检测4℃放置两年无明显降解。 用量少,节约成本,仅5ul即可完美呈现(1.5mm,10孔梳)。 广谱多带,一支即可满足多种实验需求。 3 产品特色: 本产品包含5种蛋白质混合物,分子量范围为43kD-200kD,每种蛋白的含量约为20μg。经SDS-PAGE电泳, 用考马斯亮蓝染色后可以得到分布均匀密度相近的5条带。可以用来判断SDS-PAGE电泳后蛋白质的分子量。 4 超低分子量蛋白质Marker(3.3kD-20. 1kD)(BN27016) 产品特色: 本产品包含3种多肽和2种低分子量蛋白质组成,分子量范围为3. 3kD-20. 1kD。可以用来判断SDS-PAGE上多 肽和小蛋白的分子量。本品为蛋白质和多肽混合物的冻干粉,每种蛋白含量约为15-22.5μg,配有一支1×上样缓冲 液。 5 低分子量蛋白 Marker(14.4-97.4KDa)(BN27015) 预染 SDS-PAGE 低分子量标准蛋白质(27017) BN27015 BN27017 小结 如上这几款蛋白Marker涵盖了我们实验中绝大部分需求,是非常实用、非常值得入手的几款蛋白Marker,都是即用型,具有条带分明、清晰可见、分子指示精准等特点,而且设计人性:单色、彩色型,可快速辨识。DNA分子标尺
分子标尺是 DNA 标准品,在条带之间具有精确定义的大小间隔,用于简单估计在琼脂糖凝胶上分离的单链和双链 DNA 的长度。百瑞极提供6种不同大小的分子标尺,用于简便评估条带长度。
BN24103 50bpDNA Ladder 100T 150 BN12029 100bpDNA Ladder 0.5mL 130 0.5mL*5 560 0.5mL*10 960 BN12031 1kb DNA Ladder 0.5mL 130 0.5mL*5 560 0.5mL*10 960 BN12030 DL2000 DNA Ladder 0.5mL 130 0.5mL*5 560 0.5mL*10 960 BN12036 5000bpDNA Ladder 0.5mL 130 0.5mL*5 560 0.5mL*10 960 BN12037 15000bpDNA Ladder 0.5mL 130 0.5mL*5 560 0.5mL*10 960 货号 产品名称 条带组成 电泳条件 条带图 BN24103 50bpDNA
Ladder50bp
100bp
150bp
200bp
250bp
300bp
400bp
500bp。3% Agrose,
电压 4-10V/cm,进行琼脂糖凝胶电泳BN12029 100bp DNA Ladder 100 bp
200 bp
300 bp
400 bp
500 bp
600bp
700 bp
800 bp
900 bp
1000 bp
1500 bp2-3%琼脂糖凝胶,电压 4-10V/cm。 BN12031 1kb DNA Ladder 1000 bp
2000 bp
3000 bp
4000 bp
5000 bp
6000 bp
8000 bp
10000bp 1 %琼脂糖凝胶,电压 4-10 V/cm。 BN12030 DL2000 DNA Ladder 100 bp
250 bp
500 bp
750 bp
1000 bp
2000 bp 2%琼脂糖凝胶,电压 4-10V/cm BN12036 5000bp DNA Ladder 100 bp
250 bp
500 bp
750 bp
1000 bp
2000 bp
3000 bp
5000 bp 1-2%琼脂糖凝胶,电压 5V/cm左右。 BN12037 15000bp DNA Ladder 250 bp
1000 bp
2500 bp
5000 bp
7500 bp
10000bp
15000bp 1%琼脂糖凝胶,电压 5V/cm 左右