贮藏温度：2-8°C,因为开封使用后试剂品质会逐渐变差，所以请务必一次性用完。

超数排卵处理 

在下午 4：00 -7：00 之间对 3-5w 或 9-12w 的雌鼠注射孕马血清（Pregnant Mare Serum Gonadotropin，PMSG），10IU/只。 

在注射 PMSG 47h 后，给小鼠注射同样量的人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，HCG），10IU/只。根据早上卵子收集的时间（为了得到质量佳的卵子尽可能 的在注射 HCG 16-18h 收集）。 

微滴的准备 

按照一下顺序制作 HTF 培养液的微滴后，放入二氧化碳培养箱静置，使其平衡化（建议静置过夜）。 

采取精子用：在培养皿内注入 150 微升 HTF 培养液，制作成微滴后，用矿物油覆盖培养液。 采取卵子用：在两个培养皿内分别注入 200 微升、100 微升的 HTF 培养液，制作成微滴后，用矿物油覆盖培养液。 

采取精子 

先将全部的解剖用具进行酒精消毒。 

① 对 1~2 只的成年雄性小鼠实行安乐死，用解剖剪和眼科镊取出睾丸、附睾以及脂肪的一部分，再放在滤纸上，切取附睾尾部，去除上面的血液和脂肪。 

② 用眼科镊固定住附睾尾部后，再用显微剪刀（维纳斯剪）剪开附睾尾部。 

③ 用解剖针轻轻压附睾尾部表面，将精子从附睾尾部的开口部位挤出。 

④ 用解剖针挑起被挤出来的精子块，然后导入准备好的采取精子用的培养皿内。（150 微升培养液内放入两个附睾尾部的精子）

⑤ 将精子导入 HTF 培养液内，再放入二氧化碳培养箱（37℃ 5%CO2 95%空气）进行 90 分钟的前培养。 

采取卵子

先将全部的解剖用具进行酒精消毒。 

① 进行超排处理后的雌性小鼠在注射 hCG15~17 小时后，对其进行安乐死，取出子宫、输卵管、卵巢以及脂肪的一部分，放在滤纸上切取输卵管，再除去血液和脂肪。 

② 将输卵管放入采取卵子用培养皿内的矿物油中。

③ 用眼科镊将输卵管固定在培养皿的底部，再用解剖针撕开输卵管的壶腹部，将放出的卵子块导入 200 微升的 HTF 培养液中。 

④ 采取卵子后，将采取卵子用培养皿放入二氧化碳培养箱内静置。 

体外受精~受精的确认 

① 从前培养后的精子浑浊液内（采取精子用培养皿），吸取 2 微升精子，加入至含有卵子 块的培养皿内。 

② 将受精用的培养皿放入二氧化碳培养箱（37℃ 5%CO2 95%空气）进行培养。 

③ 受精 5~6 个小时后，用玻璃制作的移卵管吸出形态正常的卵子，导入采取卵子用培养皿 100 微升 HTF，进行清洗。 

④ 仔细观察卵子，去除未受精卵后，继续培养至第二天。 

⑤ 第二天（受精 24~28 小时后）计算 2 细胞期胚胎数后，进行胚胎移植或者冷冻保存用。

注意：得到的 2 细胞期胚胎在体外培养只能到囊胚期，进行培养时用的是 KSOM 培养液。