本实验采用双抗体夹心 ELISA。用抗人 TNF-α单克隆抗体预包被酶 标板，加入适度稀释的样本和标准品，其中的 TNF-α会与其单抗结合， 洗去游离成分；加入生物素化的抗人 TNF-α抗体，抗人 TNF-α抗体与结 合在单抗上的人 TNF-α结合而形成免疫复合物，洗去游离的成分；加入 辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，洗去未 结合的酶结合物；加入显色剂，若反应孔中有 TNF-α，辣根过氧化物酶 会使无色的显色剂现蓝色；加终止液变黄。在 450nm 下测 OD 值，TNF-α 浓度与 OD450 值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出标本中 TNF-α 浓度。

                                                      检测原理示意图