产品货号：BN12022 

产品规格：50T, 100T

应用范围：DNA胶回收，PCR or 酶切产物纯化 

产品简介 

     本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中快速、可靠地回收DNA，从PCR、RFLP、磷酸化、标记、连接、杂交及其他酶促反应中纯化DNA 片段。100bp至20kb的DNA片段可通过Mini Column可纯化得到，回收率在50~90%。

产品构成

要点 

 DNA Wash Buffer：使用前将60 mL 96-100% 乙醇加入至每个 DNA Wash Buffer 瓶内。 

 100 mg 的凝胶相当于 100 µL 体积。 

 Buffer GC-A/B：低温易产生沉淀，使用前请于 37℃水浴加热至沉淀完全溶解。 

 65℃预热 Elution Buffer 或 ddH2O。 

 所有操作步骤（包括离心）均在室温下进行。

产品贮存及稳定性 

本试剂盒自购买之日起可保存 12 个月。所有试剂及用品可保存于室温（15-25℃）。

实验前需准备的材料 

 小型台式离心机和 1.5 mL 离心管 

 55~65℃水浴锅 

 负压装置 

 96~100%乙醇 

 异丙醇（对于 200 bp 以下片段的回收）

操作步骤（离心法） 

     1.琼脂糖凝胶产物纯化：从凝胶上割下带有目的片段的凝胶到一个 1.5 mL 或 2.0 mL 离心管（称量估算凝胶的体积，确保加入不少于 1 倍体积的 Buffer GC-A），加入 1 倍体积的 Buffer GC-A，置于 55~60℃水浴 8~10 min，期间颠倒混匀 几次，直至凝胶完全融化，冷却离心管至室温。

PCR 产物纯化：加入 2 倍体积的 Buffer GC-B （如 100 μ L 的 PCR 反应液，加入 200 μ L Buffer GC-B），混合均匀，瞬时离心，将溶液收集到管底。 

     注：纯化 200 bp 以下的 PCR 产物，加入 5 倍体积的 Buffer GC-A/B 到 1 倍体积的 PCR 反应液。100 mg 的凝胶相 当于 100 μ L。200 bp 以下片段的纯化，请加入 1 倍体积的异丙醇。

     2.转移上述混合液（每次不超过 700 μ L）至一个 Mini Column（自带 2 mL Collection Tube）），12,000 rpm 离心 1 min， 弃滤液，将 Mini Column 放回 2 mL Collection Tube。重复此步骤至所有样品通过。

     3.加入 600 μ L DNA Wash Buffer，12,000 rpm 离心 30 s，弃滤液，将 Mini Column 放回 2 mL Collection Tube。

     4.重复步骤 3。 

     注：确保使用前按要求加入乙醇至 DNA Wash Buffer 瓶内。

     5.可选：琼脂糖凝胶产物纯化：加入 600 μ L 无水乙醇，12,000 rpm 离心 30 s，弃滤液，将 Mini Column 放回 2 mL  Collection Tube。 

     注：如果纯化的 DNA 产物用于对盐敏感的应用(如测序、平末端连接)， 建议采用此步骤。

     6.打开 Mini Column 盖子，12,000 rpm 离心 2 min，去除残留的乙醇。

     注：开盖离心更有利于乙醇的去除。

     7.转移 Mini Column 至一个 1.5 mL Microfuge Tube，在膜中央加入 30~100 μ L Elution Buffer （ 65 ℃ 预热） 或 ddH2O (pH 在7.0~8.5)，静置 1 min，12,000 rpm 离心 1 min 洗脱 DNA。 

     可选：将洗脱下来的液体重新上柱，二次洗脱。 

     注：将 Elution Buffer 或 ddH2O 置于 65℃预热，或加入洗脱液后将 Mini Column 置于 65℃静置 5 min 再进行洗脱，将会显著提高 DNA 回收率。

     注：对于 8 kb 以上的片段，加入洗脱液后将 Mini Column 置于 65℃静置 5 min。 

     注：第一次洗脱通常得到 60~70%左右的 DNA。二次洗脱有利于回收剩下 20%的 DNA。

操作步骤（负压/离心法） 

     1. 按照离心法中步骤 1 操作。瞬时离心以收集所有液体至管底。 

     2. 根据制造商指南安装负压设备，将 Mini Column 连接到负压装置上。 

     3. 小心转移混合液至 Mini Column 中，打开负压装置，允许液体通过柱子。 

     4. 加入 600 μ L DNA Wash Buffer，打开负压装置 1 min。 

     5. 重复步骤 4。 

     6. 可选：琼脂糖凝胶产物纯化：加入 600 μ L 无水乙醇，12,000 rpm 离心30 s，弃滤液，将Mini Column 放回2 mL Collection Tube。 

     7. 打开负压装置，干燥空柱子 5 min。 8. 将 Mini Column 转移至一个 1.5 mL Microfuge Tube，在膜中央加入 30~100 μ L Elution Buffer 或 ddH2O，静置 1 min，12,000 rpm 离心 1 min 洗脱 DNA。

     注：将 Elution Buffer 或 ddH2O 置于 65℃预热，或加入洗脱液后将 Mini Column 置于 65℃静置 5 min 再进行洗脱，将会显著提高 DNA 回收率。 

     注：第一次洗脱通常得到 60~70%左右的 DNA。二次洗脱有利于回收剩下 20%的 DNA。