1 简介 

        本产品将伴刀豆球蛋白（Con A）偶联到交联及活化的琼脂糖凝胶上，该填料具有很高的化学稳定性。 

        Con A能和各类带甘露醇及葡萄糖残基的糖、糖蛋白、糖脂，所以Con A琼脂糖凝胶可以用于这类物 质的分离纯化。 

2 使用方法 

        Con A-琼脂糖凝胶 4B 对于不同的样品的亲和力不同，吸附载量取决于流速、pH、缓冲液组成和温度 等参数。 

2.1 装柱 

       （1）让所有的材料和试剂均平衡至层析实验的温度。配制缓冲液，对所有的缓冲液进行脱气处理。 

       （2）检查层析柱所有部件，特别是过滤网，密封圈，螺旋塞是否紧密，玻璃管是否干净和完整。 

       （3）根据需要量取相应量的凝胶，用去离子水清洗掉 20%乙醇。 

       （4）将柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。 

       （5）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶 在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。 

       （6）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的 1.33 倍的流速流过，使柱床稳定（注意压力不要超过填 料最大耐压）。

 2.2 平衡色谱柱

        上样前平衡层析柱至少 5-10 个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的 pH 值和电导值等于 上柱的 Buffer 的 pH 值和电导值）。

        推荐的结合缓冲液是 10-30 mM Tris-HCl pH 7.4，其中含有 0.5 M NaCl，2mM 的 MnCl2，2mM 的 CaCl2。 

2.3 上样 

       （1）样品用平衡液配制，样品一定要离心或过滤后上样。

       （2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质和没有结合的蛋白，再选择一种洗脱 液洗下目标产品。

 2.4 洗脱 

        可以用0.1-0.2 M的α-D-甲基甘露糖苷类或α-D-甲基葡萄糖苷类的糖竞争洗脱（线性或阶梯梯度），也可以通过降低pH值（但不要低于pH值4）来洗脱。

3 再生

        通过用2-3柱体积的含有0.5M NaCl的高pH（8.5）和低pH（4.5）缓冲溶液交替洗涤填料，该循环应重 复3次，然后在结合缓冲液中重新平衡。 

        对于强吸附力的物质，可以使用0.1 M硼酸盐缓冲液，pH 6.5，低流速洗5个柱体积，然后在结合缓冲 液中重新平衡使用。 

4 保存 

        4-8℃密闭保存。使用完的填料，用纯水彻底冲洗，最后保存在 20%乙醇中，4℃保存。

5 注意事项： 

       （1）上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的 正常使用。所有的缓冲液均需要用 0.45um 的过滤器过滤。 

       （2）在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于 0.1 摩尔。碱会使流速变慢。 

       （3）不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。