pGEX 系列表达载体表达的融合蛋白与谷胱甘肽 S-转移酶结合，因此可以使用谷胱甘肽 -琼脂糖凝胶填料进行纯化。pGEX 是一类以谷胱甘肽（γ-谷胱甘肽半胱胺酰甘氨酸）作为底 物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于 GST 对底物的亲和力是亚毫摩尔级的， 因此谷胱甘肽-琼脂糖凝胶亲和层析填料纯化 GST 融合蛋白的效率很高。可以用含游离谷胱 甘肽的缓冲液洗脱结合 GST 融合蛋白。

1 性能参数：

*检测条件： 层析柱 16mm×200mm *柱床高 5cm，25℃

2 使用 

2.1 缓冲液制备

所有缓冲液需要用 0.45um 的过滤器过滤。常用下面的缓冲液，适用于大部分 GST 融合 蛋白： 

结合缓冲液：PBS，pH 7.3 

洗脱缓冲液：50mM Tris-HCl，10mM 还原型谷胱甘肽，pH 8.0

2.2 样品制备 

在将样品上样之前，应将样品用 0.45um 过滤器进行过滤或离心。如果样品太粘稠，应用结合缓冲液稀释，以防止堵塞色谱柱。

2.3 柱纯化 

2.3.1 装柱 

（1）让所有的材料和试剂均平衡至层析实验的温度。配制缓冲液，对所有的缓冲液进行脱气处理。 

（2）检查层析柱所有部件，特别是过滤网，密封圈，螺旋塞是否紧密，玻璃管是否干净和完整。 

（3）根据需要量取相应量的凝胶，用去离子水清洗掉 20%乙醇。 

（4）将柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。 

（5）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。 

（6）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的 1.33 倍的流速流过，使柱床稳定（注意压力不要超过填料最大耐压）。