考马斯亮蓝G250是布拉德福德(Bradford)蛋白质定量试剂的主要成分。

考马斯亮蓝有G250和R250两种。考马斯亮蓝R250通过范德瓦尔键与蛋白质结合，其染色灵敏度比氨基黑高5倍，适用于SDS电泳微量蛋白染色。考马斯亮蓝G250不溶于三氯乙酸，能选择性地对蛋白质进行染色，几乎没有背景色。因此常用于染色，重复性和稳定性好，适合定量分析。

考马斯亮蓝g250和r250的染色和脱色

R250染色灵敏度比氨基黑高5倍，尤其适用于SDS电泳微量蛋白质染色。但蛋白质浓度超出一定范围时，对高浓度蛋白的染色不符合Beer定律。G250比考马斯亮蓝R250多二个甲基，染色灵敏度不如R250，但比氨基黑高3倍。优点在于它在三中不溶而成胶体，能选择地染色蛋白而几乎无本底色，所以常用于需要重复性好和稳定的染色，适于作定量分析。

G250中的G就是Green，偏绿，R250中的R代表Red，偏红，在进行小分子量蛋白的Tricine电泳是常用G250染色，至于加热，染和脱色都可以加热，但都是在急需知道结果的情况下采用，加热后染的背景色很重脱色时间就长而且很难将背景色脱干净，脱色液经常加热会导致固定剂的会发，很快脱色剂就没用了，脱色效果很差。

考马斯亮蓝G-250在流离状态下呈红色，最大光吸收在465nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比。

考马斯亮蓝G-250配制

1.称取100mg考马斯亮蓝G-250。

2.溶于50ml90%乙醇中。

3.加入85%的磷酸10ml。

4.最后用蒸馏水定溶到1000ml。（此溶液在常温下可放置一个月。）

考马斯亮蓝G-250染色原理

考马斯亮蓝G-250简称R250，是常用蛋白染色剂，可用于染色丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶中的蛋白质。

考马斯亮蓝G-250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。

当考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/mL，最小可测2.5μg/mL蛋白质，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。

考马斯亮蓝染色法的优点:

(1)灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质-染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。

(2)测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好。因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。

(3)干扰物质少。如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。

考马斯亮蓝染色法的缺点：

(1)由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此考马斯亮蓝染色法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。

(2)仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)等。